PCR实验室的污染源与措施


  PCR实验室是分子诊断的基础,也是进行PCR实验的必备场所实验室中不注意污染的话会影响检验结果博泰小编带大家了解PCR实验室的污染源与措施有哪些。

一、PCR实验的污染来源

1、样本间交叉感染:收集样本的容器被污染或样本密封不严导致外溢;不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖;移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散,相互交叉污染。 

2、实验试剂污染:主要是在 PCR 组分试剂加样过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。加样过程中PCR试剂对温度十分敏感,需要通过冰浴使得PCR试剂和PCR板/管处于0℃,但这个过程也充满污染风险。

3、扩增产物污染:大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖,这是PCR反应中最主要、最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大,远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。

、防止实验污染都有哪些措施

1、正确佩戴手套:手套未紧密贴合拇指、食指和中指,在进行开盖操作时容易发生交叉污染。 

2、正确使用生物安全柜:简单、整洁、避免通风口堵塞;操作前后紫外线照射,消毒剂随手可及;废液缸里有1/3体积的含氯消毒液,并且及时清理废液缸,保证废物不超过废液缸体积的2/3。  

3、核酸提取仪去污染:每天多批次检测时,在每一批次检测完以后必须用75%的乙醇和核酸去除剂对仪器进行去污染。

4、重视通风:不定期对房间进行通风,每次至少持续30min。

5、PCR扩增区去污染:PCR反应管必须盖紧,避免扩增后的核酸对环境的污染。

6、人员要求进入PCR实验室,需要经过从基础理论、实验原理、规范操作、质量保证到注意事项等规范的培训,并获取PCR上岗证。 

7、检测风险检测过程中,样本的开盖,核酸提取的震荡、离心都有可能生气溶胶,有感染的风险。

8、防护要求必须按照生物安全三级实验室的个人防护要求进入。

9、建设要求PCR实验室的建设需要设置标准的“四区”:试剂准备区、标本制备区、PCR扩增检测区和扩增产物检测区。每个独立实验区设置有缓冲区,各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染,并降低扩增产物对人员和环境的污染。

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